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上海千實工程師解析高效毛細管電泳基本原理

上海泛標紡織品檢測技術有限公司是標準集團(香港)有限公司的內地銷售分公司,上海千實精密機電科技有限公司是負責工廠生產,我司作為一家集研發、制造、銷售、培訓、服務于一體的現代技術企業,致力于將更多檢測儀器輸送市場,提供紡織類、皮革類、燃燒類、汽車內外飾件、材料環境氣候老化等等檢測儀器,更可接受非標定制,購買前均可按照客戶的要求進行針對性試驗,確保所購儀器適用。 上海千實精密機電科技有限公司成立于2012年,專注于研發、設計及生產紡織測試儀器,為學術研究單位及檢測機構提供紡織測試儀器和服務,上海千實是目前國內較有競爭力和研發實力的紡織檢測儀器廠家之一,研發團隊由一群經驗豐富的工程師組成,本著全心全意為客戶服務,努力推動紡織檢測儀器技術革新而努力。

  高效毛細管電泳是近年來發展起來的一種分離、分析技術,它是凝膠電泳技術的發展,是高效液相色譜分析的補充。該技術可分析的成分小至有機離子、大至生物大分子如蛋白質、核酸等。可用于分析多種體液樣本如血清或血漿、尿、腦脊液及唾液等,HPLC分析高效、快速、微量。

  電泳遷移


  不同分子所帶電荷性質、多少不同,形狀、大小各異。一定電解質及PH的緩沖液或其它溶液內,受電場作用,樣本中各組分按一定速度遷移,從而形成電泳。


  電泳遷移速度(v)可用下式表示:


  v=uE


  其中E為電場強度(E=V/L,V為電壓,L為毛細管總長度)。u為電泳淌度。


  電滲遷移


  電滲遷移指在電場作用下溶液相對于帶電管壁移動的現象。特殊結構的熔合硅毛細管管壁通常在水溶液中帶負電荷,在電壓作用下溶液整體向負極移動,形成電滲流。帶電微粒在毛細管內實際移動的速度為電泳流和電滲流的矢量和。


  分離分析類型


  根據其分離樣本的原理設計不同主要分為以下幾種類型:


  ①毛細管區帶電泳;


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 ?、勖毠苣z速電動色譜;


  ④毛細管凝膠電泳;


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  毛細管區帶電泳(CZE)為HPCE的基本操作模式,一般采用磷酸鹽或硼酸鹽緩沖液,實驗條件包括緩沖液濃度、pH值、電壓、溫度、改性劑(乙腈、甲醇等),用于對帶電物質(藥物、蛋白質、肽類等)分離分析,對于中性物質無法實現分離。毛細管膠束電動色譜(MECC)為一種基于膠束增溶和電動遷移的新型液體色譜,在緩沖液中加入離子型表面活性劑作為膠束劑,利用溶質分子在水相和膠束相分配的差異進行分離,拓寬了CZE的應用范圍,適合于中性物質的分離,亦可區別手性化合物,可用于氨基酸、肽類、小分子物質、手性物質、藥物樣品及體液樣品的分析。


  毛細管等速電泳(CITP)采用先導電解質和后繼電解質,構成不連續緩沖體系,基于溶質的電泳淌度差異進行分離,常用于離子型物質(如有機酸),并因適用較大內徑的毛細管而可用于微制備,但本法空間分辨率較差。毛細管等電聚焦電泳(CIEF)用于具兼性離子的樣品(蛋白質、肽類),等電點僅差0.001可分離的物質。毛細管凝膠電泳(CGE)依據大分子物質的分子量大小進行分離,主要用于蛋白質、核苷酸片段的分離。此外,還有毛細管電色譜(CEC)及非水毛細管電泳(CNACE),用于水溶性差的物質和水中難進行反應的分析研究。目前CZE和MECC用得較多,本文以這兩種方法為例來說明HPLC的原理。


  HPLC選用的毛細管一般內徑約為50μm(20~200μm),外徑為375μm,有效長度為50cm(7~100cm)。毛細管兩端分別浸入兩分開的緩沖液中,同時兩緩沖液中分別插入連有高壓電源的電極,該電壓使得分析樣品沿毛細管遷移,當分離樣品通過檢測器時,可對樣品進行分析處理。HPLC進樣一般采用電動力學進樣(低電壓)或流體力學進樣(壓力或抽吸)兩種方式。在毛細管電泳系統中,帶電溶質在電場作用下發生定向遷移,其表觀遷移速度是溶質遷移速度與溶液電滲流速度的矢量和。


  所謂電滲是指在高電壓作用下,雙電層中的水合陰離子引起流體整體地朝負極方向移動的現象;電泳是指在電解質溶液中,帶電粒子在電場作用下,以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的現象。溶質的遷移速度由其所帶電荷數和分子量大小決定,另外還受緩沖液的組成、性質、pH值等多種因素影響。


  帶正電荷的組份沿毛細管壁形成有機雙層向負極移動,帶負電荷的組分被分配至毛細管近中區域,在電場作用下向正極移動。與此同時,緩沖液的電滲流向負極移動,其作用超過電泳,終導致帶正電荷、中性電荷、負電荷的組份依次通過檢測器。